Энтеральный клостридиоз -этоострое инфекционное заболевание, клинически проявляющееся инфекционным токсикозом и синдромом гастроэнтерита или энтероколита, реже - некротическим энтеритом или сепсисом, возбудителем которого является С. Perfringens.
С. perfringens долгое время считались возбудителем только газовой гангрены. В середине XX века была установлена роль этих микроорганизмов в возникновении пищевых токсикоинфекций при энтеральном пути инфицирования.
С.perfringens - грамположительные крупные палочки со слегка закругленными концами, способны образовывать споры, располагающиеся субтерминально, имеют капсулу, не обладают подвижностью, являются облигатными анаэробами, но толерантны к кислороду. Биохимически активны: ферментируют глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу и другие углеводы до кислоты и газа. Продуцируют протеолитические ферменты, обладают гемолитической активностью. Культивируются на многокомпонентных питательных средах, содержащих питательный агар, восстановители кислорода, факторы роста(Calarnbia агар, сердечно-мозговой агар, TSN-arap и др.). Для селективного роста клостридий в питательную среду добавляют неомицин и другие антибиотики.
Выделяют 5 серотипов, обозначаемых от А до Е в зависимости от серологических отличий экзотоксина. Тип A С.perfringens наиболее часто вызывает газовую гангрену, серотипы A,C,D,E могут вызывать пищевые токсикоинфекции, особенно тяжелые некротические энтериты вызывает серотип С.
Естественной средой обитания клостридий является кишечник животных, преимущественно травоядных, человека и окультуренные почвы, куда клостридии вместе с фекалиями попадают в большом количестве. В почве клостридии длительно сохраняются в форме спор, при благоприятных условиях способны к вегетации.
Лабораторная диагностика проводится микроскопическим, бактериологическим методами, ставят биопробу, используют экспресс-методы. Исследованию подлежит материал от больного или трупа, перевязочный и шовный хирургический материал, а также почва, пыль и воздух.
Исследуемый материал берут из глубины раны и помещают в транспортную среду, в которой созданы анаэробные условия. Жидкие материалы забирают шприцом с притертым поршнем и вносят в транспортную среду или, если материала много, доставляют в бактериологическую лабораторию непосредственно в заполненном шприце. Материал для бактериоскопии берут ватным тампоном и помещают в стерильную пробирку.
Бактериологическое исследование занимает длительное время и выполняет подтверждающую роль в диагностике.
На 1-й этапе исследуемый материал делят на две порции, кусочки тканей предварительно растирают в ступке и разводят изотоническим раствором NaCl. Одну порцию прогревают при 80°С в течение 20-30 минут для уничтожения попавших в рану неспоровых бактерий, что облегчает получение чистой культуры клостридий, споры которых сохраняют жизнеспособность. Испытуемые засевают на элективные и/или селективные среды для анаэробов. Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37°С в течение 2-4 суток.
На 2-й этапемакроскопически и микроскопически изучают выросшие колонии. На анаэробном кровяном агаре клостридии образуют крупные, плоские, чаще шероховатые, колонии, нередко дают ползучий рост. Колонии С.perfringens обычно окружены двойной зоной гемолиза: прозрачной зоной полного гемолиза вокруг колоний и зоной неполного а-гемолиза по периферии. На среде, содержащей яичный желток, а-токсин гидролизует лецитин, что проявляется в виде непрозрачных опалесцирующих преципитатов. Изучают мазки из колоний, окрашенные по Граму и нативные препараты; «раздавленная капля» - для определения подвижности. С.perfringens не обладает подвижностью. Выделенную культуру проверяют на аэротолерантность, инкубируя на кровяном агаре в аэробных условиях (где не должно быть роста) и в анаэробных условиях, в которых клостридии должны расти.
На 3-й этапе выделенную культуру идентифицируют и определяют видовую принадлежность. С этой целью применяют биохимические тест-системы.
Для ускоренной диагностики производят посевы на среду Вильсон-Блера и в пробирку с молоком - по изменению которых можно обнаружить с достаточной надежностью присутствие C.perfringens в течение 6 часов. Культивирование проводят при 42°С. Среда Вильсон-Блера через 4-6 часов чернеет, появляется множество разрывов агара вследствие газообразования. Молоко через 2-4 створаживается - сверху образуется сгусток казеина, пронизанный пузырьками газа, в нижней части пробирки - прозрачная сыворотка. Если используют лакмусовое молоко, то сгусток приобретает красный цвет.
Кроме того, учитывают результаты микроскопического исследования содержимого пробирок - по Граму, Бурри-Гинсу и прямым методом иммунофлюоресценции (МИФ).
Врач-бактериолог
отделения санитарно-бактериологических исследований
микробиологической лаборатории
ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии
в Республике Марий Эл» Ковтанюк Н.А.