Дифтерия – острое антропонозное инфекционное заболевание (токсикоинфекция), которое характеризуется фибринозным воспалением в месте входных ворот и интоксикацией организма с преимущественным поражением сердца, почек, нервной системы.
Возбудитель дифтерии – коринебактерии дифтерии Corynebacterium diphtheriae (C. diphtheriaе), продуцирующие дифтерийный токсин (экзотоксин). Источником инфекции является больной или бактерионоситель токсигенных С. diphtheriae. Основной механизм передачи – воздушно-капельный, также существует контактно-бытовой; пути передачи – аэрозольный и контактно-бытовой. Нетоксигенные С. diphtheriae, не продуцирующие экзотоксин, не вызывают дифтерийную инфекцию; данные микроорганизмы выделяются при фарингите, артрите, эндокардите и других гнойно-воспалительных заболеваниях.
Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции проводится в соответствии с МУК 4.2.3852-23.
Бактериологический метод является «золотым стандартом» лабораторной диагностики дифтерийной инфекции и предусматривает выделение возбудителя путем посева на плотные питательные среды с последующим обязательным определением токсигенности и биохимических свойств. Продолжительность бактериологического исследования на дифтерийную инфекцию составляет 3—5 дней.
Первый день исследования. Посев исследуемого материала на селективную дифференциально-диагностическую или, при необходимости, в жидкую транспортную среду. Инкубирование в термостате при плюс (37 ± 1) °C.
Второй день исследования (24 ч). Изучение выросших колоний, при возможности постановка пробы на токсигенность и посев культуры на скошенный сывороточный агар. При использовании жидкой транспортной среды проводится пересев на селективную дифференциально-диагностическую среду.
Третий день исследования (48 ч). Учет результатов пробы на токсигенность, поставленной во второй день исследования. Постановка пробы Пизу и первичный учет через 6 ч. В случае наличия специфических линий преципитации и при положительной пробе Пизу выдают документированный ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии. Посев чистой культуры, выделенной во второй день исследования, на среду Пизу (учет через 6 ч и окончательный на следующий день), на среды Гисса для изучения сахаролитической активности (глюкоза, сахароза, крахмал), постановка тестов на нитраты и уреазу. Повторный просмотр (через 48 ч) чашек первичного посева с помощью МБС. Постановка проб на токсигенность и отсев колоний на скошенный сывороточный агар. В случае использования жидкой транспортной среды ход исследования см. начиная со второго дня и далее по схеме. Выдача бактериологического ответа об отсутствии коринебактерий дифтерии. При обнаружении у исследуемой культуры фермента цистиназы, отсутствии фермента уреазы можно выдать предварительный ответ о выделении коринебактерий дифтерии.
Четвертый день исследования (72 ч). Учет токсигенных свойств культуры, выделенной в третий день исследования. При обнаружении специфических линий преципитации и положительной пробе Пизу выдают документированный ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии. Определяют биохимические свойства (цистиназа, глюкоза, сахароза, крахмал, нитраты, мочевина). Учет биохимических свойств культуры (токсигенной или нетоксигенной), выделенной во второй день исследования (через 24 ч инкубации первичного посева). Выдача бактериологического ответа о выделении нетоксигенных коринебактерий дифтерии с указанием биохимического варианта и дополнительного ответа о биохимических свойствах токсигенных коринебактерий дифтерии, выделенных ранее.
При диагностике дифтерийной инфекции как дополнительные методы используются иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Биологическим материалом для серологического исследования служит сыворотка крови. Пациента обследуют в динамике. Первый забор крови проводится не позднее 5 дней от начала заболевания и строго до начала введения противодифтерийной сыворотки. Повторно кровь берут не ранее, чем через 14 дней от первого забора. Для получения объективных данных обе сыворотки должны быть поставлены в одной постановке.
ПЦР-исследование применяется при обследовании пациентов с профилактической целью, по эпидемиологическим показаниям и параллельно с бактериологическим исследованием – с диагностической целью. Результаты молекулярно-генетического исследования должны быть получены в течение 24ч от момента взятия биологического материала.